尊龙凯时推出的荧光定量PCR检测试剂盒，采用探针法原理进行了创新开发，具有以下显著特点：

产品优势

1. 即开即用，用户只需提供样品DNA模板即可。

2. 优化引物，提高灵敏度，确保准确检测。

3. 附带阳性对照，方便识别假阴性样品。

4. 高特异性，引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的保守区域，避免与其他生物样本DNA的交叉反应。

5. 可进行定性和定量检测，定量检测的线性范围覆盖至少五个数量级。

6. 充足的使用次数，本产品可满足50次20μL探针法荧光定量PCR反应的需求。

7. 仅限科研使用。

操作步骤

一、DNA提取

用户可根据自选的方法提取纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品

为了避免污染，阳性对照的稀释操作需在独立区域进行：

1. 标记6个离心管，编号为7，6，5，4，3，2。
2. 在每个管中加入45μL DEPC-H2O（建议使用带芯枪头）。
3. 在7号管中加入5μL阳性对照（1×10E8拷贝/μL），充分震荡1分钟，获得1×10E7拷贝/μL的标准样品，放冰待用。
4. 依次更换枪头，继续稀释，以此类推直至获得6个稀释样品。
5. 如无需制作标准曲线，可直接将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL。

三、试剂配制

根据待检样品数量，准备足够的qPCR管（N+2个），并向各PCR管中加入相应的成分，具体配制方法可参考详细说明书。

四、添加模板

在qPCR管中依次加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板和阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应

将PCR管放入扩增仪中，按照详尽的扩增程序进行设置，可参考详细说明书。

六、结果分析

1. 如制作标准曲线，则将阳性对照浓度的log值作为横轴，Ct值作为纵轴绘制标准曲线，并由此推算样品DNA浓度。

2. 若未制作标准曲线，依据以下标准判断结果：

• 阳性对照：Ct值<30，显著指数增长，呈现典型S型曲线。
• 阴性对照：Ct值≥38或无Ct值，无明显增长期及平台期。
• 样本测试：Ct值<35，显著指数增长，样本阳性；Ct值≥38或无Ct值样本阴性；Ct值在35-38范围内，需重复实验，判断结果。

运输与保存

建议低温运输，并在-20℃条件下保存，保质期为一年。阳性对照需单独存放，避免污染其他试剂。

选择尊龙凯时的荧光定量PCR检测试剂盒，助您在生物医学研究中实现精准检测，推动科研进步。