在进行GPCR19激动剂（TGR5受体激动剂）的实验时，遵循以下操作规程可确保实验的有效性和准确性。

步骤一：细胞准备

在96孔板中，每孔加入100μL细胞悬液。对于细胞增殖实验，通常每孔使用2000个细胞；而对于细胞毒性实验，每孔则添加5000至10000个细胞。所用细胞数量需根据细胞的大小及增殖速度进行调整。细胞应在37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养24小时，确保其处于适宜的生长状态。

步骤二：化合物添加

接下来，根据实验设计，将适当浓度的0～10μL受试化合物加入每个孔中。

步骤三：孵育

将96孔板放置于37℃、5% CO2及100%湿度的细胞培养箱中，孵育设定的时间以完成药物作用。

步骤四：MTT溶液制备

将5×MTT稀释液调配成1×MTT溶液，并准备进行下一步实验。

步骤五：MTT还原

每孔添加50μL的1×MTT溶液，并在37℃下孵育4小时，以使MTT被细胞还原为甲臜。

步骤六：液体处理

在孵育结束后，吸出孔中的上清液，然后在每孔中加入150μL DMSO，以使甲臜充分溶解。使用平板摇床将其摇匀，确保均匀性。

步骤七：光密度检测

最后，利用酶标仪在570nm波长下检测每个孔的光密度（如没有570nm滤光片，可使用560-600nm的滤光片进行检测）。

步骤八：结果分析

分析结果的步骤如下：

• 细胞存活率计算：将每个测试孔的OD值减去本底OD值（即培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔的OD值（培养基加不同稀释度的受试药物加MTT，无细胞），然后计算各重复孔OD值的平均数±SD。细胞存活率以T/C%表示，其中T代表加药细胞的OD值，C为对照细胞的OD值。细胞存活率%=（加药细胞OD/对照细胞OD）×100。
• 药物浓度计算：求出T/C=50%时的药物浓度（IC50）及T/C=10%时的药物浓度（IC90），以评估药物的有效性。

通过这些步骤，您将能够有效地评估GPCR19激动剂的生物活性，为后续的生物医疗研究和产品开发提供重要数据。选择尊龙凯时的相关产品，将助力您的研究工作实现更高水平的成功和突破！