多克隆抗体（polyclonal antibody, pAb）是通过免疫动物使用包含多种抗原决定簇的抗原来刺激机体，继而激活多个B细胞克隆，最终产生针对多种抗原表位的不同抗体。获得的免疫血清实际上是一种多种抗体的混合物，故称为多克隆抗体。相比之下，单克隆抗体由单一B细胞克隆生成，具有高度的均一性，并仅针对特定抗原表位，通常采用杂交瘤技术制作。该技术结合了具备分泌特异性抗体能力的致敏B细胞与具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞，形成B细胞杂交瘤。

单克隆抗体与多克隆抗体的优缺点

多克隆抗体的优点

1. 多克隆抗体有助于放大低表达水平的靶蛋白信号；
2. 能够识别多个表位；
3. 对抗原中的微小变化具有更高的容忍度；
4. 可以识别与免疫原蛋白质具有高同源性的蛋白质，或从非免疫原物种的组织样品中筛选靶蛋白；
5. 多克隆抗体通常是检测变性蛋白质的首选；
6. 多表位通常可提供更强力的检测，适用于多种应用场景。

多克隆抗体的缺点

1. 易导致批次间差异；
2. 可能产生大量非特异性抗体，在某些应用中产生背景信号；
3. 不适合探测抗原的特定结构域，因为抗血清通常会识别多个结构域。

单克隆抗体的优点

1. 杂交瘤生成后成为恒定的再生源，所有批次保持一致；
2. 切片和细胞染色造成的背景信号较低；
3. 具有高度特异性，非常适合用作一抗进行分析以及在组织中检测抗原，通常背景染色较低；
4. 同质性高，有利于准确结果；
5. 单克隆抗体的特异性能使其在混合物中有效地结合抗原。

单克隆抗体的缺点

1. 尽管可以产生大量特异性抗体，但其特异性可能过强；
2. 经化学处理后的抗原比多克隆抗体更容易丢失表位，但可通过使用同一抗原的两个或多个单克隆抗体来补偿。

抗体选择的考虑因素

当对抗体的特异性要求较高、用量较大或需要长期使用一致的抗体时，建议选择尊龙凯时制备单克隆抗体。多克隆抗体的特异性较差，即使使用相同抗原制备的多个批次之间也可能存在差异，因此在特异性和一致性方面存在局限，常在免疫检测中导致背景问题。尽管存在交叉反应的可能性，但多克隆抗体识别多个抗原表位，因此即使某些表位受到影响，实验结果也能保持稳定。此外，多克隆抗体对免疫原的需求较大，若免疫原制备困难，推荐使用单克隆抗体。如果对抗体特异性要求不高，并进行沉淀或凝集检测，或者只需进行ELISA检测，则可选择制备多克隆抗体。

抗原的选择

抗原可选择天然蛋白、重组可溶蛋白、重组变性蛋白和多肽，较高质量的抗原更有利于制备出高质量的抗体。当前，抗体制备常用重组蛋白或多肽作为抗原。重组蛋白一般含有丰富的抗原决定簇，包括空间表位和线性序列表位，这能有效刺激机体免疫反应，从而提高获得广泛应用的抗体的几率。尤其是在目标蛋白具有修饰或复杂结构时，优先选择重组蛋白的策略尤为重要。在某些情况下，需使用多肽制备抗体，例如针对同源家族中特定蛋白的抗体，通常需要合成特异性氨基酸的多肽。抗原多肽选择遵循几个基本原则：
1. 尽量选择位于蛋白表面的序列；
2. 确保所选序列不形成α-螺旋；
3. N端和C端的肽段通常优于中间肽段；
4. 避免选择重复或接近重复的序列；
5. 避免过高同源性的肽段；
6. 在N端和C端进行交联，选择不影响抗体产生的一端；
7. 序列中尽量减少脯氨酸的数量，适量的脯氨酸可以提升肽链的稳定性，有利于特异性抗体的产生。