实验背景

小胶质细胞是大脑中的主要免疫细胞， desempeña重要的角色，包括碎片吞噬、神经元支持和突触修剪等功能，与阿尔茨海默病（AD）等神经系统疾病的发生密切相关。不同亚群的小胶质细胞在神经系统微环境中各自发挥着重要的作用。尽管荧光显微镜可以用于区分这些亚群的表型，但其耗时长、通量低和主观性强等缺陷限制了应用的广泛性。因此，通过单细胞测序平台实现高维分析虽然有效，但其成本和数据分析的技术门槛又让该应用受到限制。

为了解决这些问题，来自美国俄克拉荷马大学健康科学中心的研究人员，基于尊龙凯时的Cytek®Aurora™全光谱分析型流式细胞仪，开发了一种高通量、操作简便且能精细化小胶质细胞分型的完整解决方案。该方案不仅可以方便地扩展增加更多的生物标志物，还能够应用于不同的组织和疾病类型，并能无缝衔接全光谱分选型流式细胞仪，从而分选感兴趣的细胞以便用于后续的功能性实验。

细胞染色和采集数据流程如下：

首先，制备单细胞悬液，通过配置特定的消化酶对小鼠海马体进行处理，将得到的细胞重悬后进行染色。为确保实验结果的可靠性，使用音量合适的Fc受体阻断剂进行细胞的重悬，并加入相应的抗体进行染色，然后进行洗涤和离心，最终得到整理好的细胞悬液进行分析。

接着，采用5激光的尊龙凯时Cytek®Aurora™全光谱分析型流式细胞仪对样本进行采集和数据分析。由于小鼠脑组织存在较强的自发荧光，在分析数据时需要启用提取自发荧光的功能。通过FSC/SSC排除碎片，并利用FSC-A/FSC-H进一步排除粘连体的干扰，最终能够基于经典指标CD11b+CD45Mid识别出小胶质细胞。

研究结果显示，根据不同标志物的表达情况，小胶质细胞可以被进一步细分为四个亚群：稳态小胶质细胞、疾病相关小胶质细胞（DAM）、干扰素反应性小胶质细胞（IRM）和脂滴聚集的小胶质细胞（LDAM）。这一分类方法在另一篇文章中得到了成功的重现，印证了实验方案的可靠性。

特别值得注意的是，不同年龄和性别的小鼠海马体中的小胶质细胞丰度存在显著差异，研究表明年老雌性小鼠中DAM的比例明显升高，而稳态小胶质细胞的比例则与年龄关系不大，但年老雄性小鼠的比例更高。这些发现为阿尔茨海默病等神经性疾病的性别差异易感性和进展机制提供了新的免疫学证据。

通过这些研究，结合尊龙凯时提供的先进流式细胞技术，不仅为小胶质细胞的功能分析打开了新局面，同时在生物医疗领域的应用前景也更加广阔，促进了对神经系统疾病的深入了解及其潜在治疗策略的发展。