生物体在不同温度条件下的暴露会引起细胞功能的改变,以及与细胞损伤修复相关基因的表达变化。热休克应激反应机制在细菌、植物和动物中是一种高度保守的现象,其中包括热休克蛋白的表达。作为研究生理和细胞对热应激反应的关键模型,秀丽隐杆线虫在探讨其与病理和衰老的关系方面发挥了重要作用。
通过采用WMicrotrackerARENA系统,我们能实时监测小动物在压力下的行为反应动力学,同时评估新小分子、基因或天然化合物的效果。以热应力下行为变化的动力学为例,在这项实验中,我们观察到虫群在温度胁迫下的行为动态效应,发现L3幼虫和3龄成虫表现出不同的反应。
实验方法如下:
(1) 在20℃的NGM+OP50培养基中获得同步虫群;
(2) 使用缓冲液从培养皿中收集蠕虫;
(3) 在10μl的体积内统计蠕虫数量,调整浓度至50蠕虫/20μl;
(4) 按每孔20μl的虫液转移至含有无菌NGM的6孔微孔板;
(5) 使用WMicrotrackerARENA记录活虫板的活动,温度设定如下:22℃下观察30分钟,37℃下观察90分钟,最后再回到22℃观察360分钟;
(6) 使用MSExcel生成数据报告和图表。
WMicrotracker小动物活动力分析系统专为液体中培养的小模式动物的测试而优化,能够在24、48、96或384孔板中自动量化其行为活动。实验已成功应用于线虫(Caenorhabditis elegans)、斑马鱼幼虫(Zebrafish larvae)以及昆虫幼虫等,适合于化合物筛选、RNA干扰实验、转基因研究、毒性测试、麻痹实验、代谢研究、疾病模型、突触调节、抗逆性测试等多种用途。
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