操作步骤

一、培养基制备

1. 准备器皿，如三角瓶、试管、培养皿、烧杯及吸管等，根据不同需要进行清洗、干燥和消毒。

2. 溶解培养基配料：首先在烧杯中加入适量水，按照培养基配方称取各项材料，依次加入缓冲化合物、主要元素、微量元素及维生素等，最后补充足够的水量。

3. 调整pH值；

4. 添加凝固剂，如琼脂或明胶。将凝固剂加入液体培养基中，加热并不停搅拌直至完全溶解，并补充蒸发掉的水分。

5. 进行过滤和分装；

6. 包装并标记；

7. 灭菌；

8. 进行无菌检查。

二、接种

1. 斜面接种：根据不同菌种的特性，选择合适的方法，例如点接、中央划线、稀波状及密波状蜿蜒划线法、或挖块接种法。

2. 穿刺接种：使用无菌接种针从原菌种斜面挑取少量菌苔，自上而下刺入柱状培养基中心，直到接近管底（注意勿刺到底），然后沿原穿刺路线慢慢抽出接种针。适合用于细菌和酵母菌等。

3. 液体接种：使用无菌滴管吸取少量固体斜面菌种或原菌液，并接种于新鲜液体培养基中。

三、培养

将接种后的培养基放入培养箱，依照适宜条件培养直至细胞稳定期或获得成熟孢子。

四、保藏

1. 保藏温度和时间：应在4℃－6℃下保存，通常每3－6个月进行一次移植。部分菌种，如芽裂酵母、阿舒假囊酵母和棉病囊霉等，需每1－3个月移植一次。

2. 保藏湿度：采用相对湿度表示，应维持在50%－70%。可使用毛发湿度计或干湿球湿度计进行测量。

五、移植培养

将培养物转接到另一新鲜培养基中，并在适宜条件下继续培养。

六、复壮菌种

如发现菌种退化，应将其引入原生活环境中促使生长繁殖，通过纯种分离与宿主体内生长等方法进行复壮。

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