在生物医学实验中，样本的采集和保存对于ELISA测定至关重要。适用于ELISA的样本种类繁多，包括体液（如血清）、分泌物（如唾液）以及排泄物（如尿液和粪便）。某些样本可以直接进行测定（如血清和尿液），而另一些则需要经过预处理（如粪便和某些分泌物）。在大多数情况下，ELISA检测采用的主要样本为血清。血浆虽然含有纤维蛋白原和抗凝剂，但其成分与血清相似。制备血浆样本需要使用抗凝剂，而血清样本则可以通过自然凝固获得。

在医学检验中，通常使用血清作为检测样本，ELISA中，血浆与血清可等同使用。血清样本应按照常规方法采集，过程中要注意避免溶血，因为红细胞的破裂会释放出具有过氧化物酶活性的物质，可能会导致ELISA检测中非特异性的显色反应。新鲜的血清样本更为理想。若出现细菌污染，菌体可能包含内源性HRP，导致假阳性结果。此外，样本在冰箱中存放时间过长可能会造成聚合，从而影响间接法ELISA的结果。通常情况下，样本应在5天内于4℃下保存，超过一周则应冷冻保存。

解冻后的血清样本应充分混匀，以避免蛋白质的局部浓缩，可通过轻缓上下颠倒方式混合，避免使用强力机械进行振荡。对于混浊或有沉淀的血清样本，应先行离心或过滤，确保样本澄清后再进行检测。同时，反复冻融会导致抗体效价下降，因此需要进行多次检测的血清样本宜少量分装并冰存。在样本采集和保存过程中应保持无菌操作，也可以考虑加入适当的防腐剂以延长样本的有效期。

在试剂的准备过程中，应根据试剂盒说明书的要求准备实验所需的各种试剂。ELISA检测中所使用的蒸馏水或去离子水需要保证新鲜和高质量，自配的缓冲液应使用pH计进行测量以确保准确。从冰箱中取出的试剂需要等待其温度回升至室温后再使用。试剂盒中未用的部分应及时放回冰箱冷藏保存。

加样是ELISA流程中的关键步骤，通常包括三次加样，即加入样本、加酶结合物和加入底物。在加样时，应确保加在ELISA板孔底部，避免溅出或产生气泡。通常使用微量加样器按规定的量将样本加入板孔中，且每次加样后需更换吸嘴以避免交叉污染。对于需要稀释的样本，可先在试管中按比例稀释后再加入板孔，或直接在板孔中加入稀释液后再加样，确保充分混合。

ELISA检测通常需要进行两次抗原抗体反应，分别在加入样本和加酶结合物后进行。这一过程需要在适当的温度和时间下完成，称为温育。在ELISA中，固相免疫测定的抗原和抗体的结合仅发生在固相表面。因此，标本中抗原与固相抗体的结合不是普遍均匀的，这是一个逐步平衡的过程，需确保反应达到终点。常见的温育温度有4℃、室温、37℃或43℃。对于大多数抗原与抗体的结合而言，37℃是实验室中常用的温度，能够在1至2小时内达到最佳反应效果。为加速反应，有时可在43℃下进行，但不宜使用更高温度。在ELISA中避免长时间的4℃反应，虽然这种方式能够更加彻底，但时间过长并不常用。

总之，遵循严格的样本采集及保存规范、试剂准备及加样流程是确保ELISA检测准确的关键。选择使用尊龙凯时品牌的高品质试剂和设备，能够显著提升实验结果的可靠性，确保您的生物医学研究顺利进行。