最小抑菌浓度(MIC)的测定是评估抗菌剂抑制微生物生长能力的重要实验技术,常用的测定方法包括微量稀释法和肉汤稀释法。本研究特别聚焦于琼脂稀释法和营养肉汤稀释法,这两种方法各有其特点和优势。
琼脂稀释法
琼脂稀释法因其操作简便、经济实惠,适合高通量筛选而广受欢迎,尤其适合实现自动化操作以及精确控制药物的浓度。此方法适用于不溶性抗菌产品,其原理为将不同浓度的抗菌剂混合溶解于琼脂培养基中,通过点种细菌观察其生长情况,以确定抗菌剂抑制细菌生长的最低浓度,即最小抑菌浓度(MIC)。
操作步骤
- 抗菌溶液的配制:在无菌条件下,将5ml或5g样品置于45ml灭菌磷酸缓冲液中,充分震荡以形成10%的均匀溶液。
- 含抗菌剂培养基的制备:将配制的抗菌溶液与PBS进行系列稀释,以制备不同浓度的受试液,置于45℃~50℃的水浴中待用。
- 双倍浓度培养基的制备:将76g MH琼脂培养基溶解于1000ml水中,加热至沸腾后,进行121℃下的压力蒸汽灭菌15分钟,然后冷却至45℃~50℃备用。
- 含抗菌液的培养基制备:在平皿内加入10ml抗菌液及10ml的双倍MH琼脂培养基,边加边摇匀,待凝固后备用。
- 菌种接种:使用加样器取1μl~2μl的菌悬液(约为107cfu/ml)并点种于含抗菌培养基的平皿。
- 阳性对照:采用相同方法接种不含抗菌成分的MH琼脂平板。
- 培养观察:将接种后的平板放置于35℃培养箱内倒置培养18h~24h,观察结果。
评判标准为在何浓度的抗菌液中,细菌的生长被完全抑制,即可确定样品的MIC。
营养肉汤稀释法
与琼脂稀释法不同,营养肉汤稀释法适用于可溶性抗菌产品。此方法通过将不同浓度的抗菌剂溶解于营养肉汤培养基中,接种细菌以确定MIC。
操作步骤
- 制备金黄色葡萄球菌或大肠杆菌悬液。
- 含抗菌剂培养基制备:将抗菌溶液用蒸馏水进行系列对倍稀释,取25ml的各稀释度受试液与25ml的双倍浓度营养肉汤混合。
- 接种:将0.1ml的菌悬液(约为108cfu/ml)接种于含抗菌剂的试管中。
- 阳性对照组和阴性对照组的制备:同样接种不含抗菌剂的营养肉汤和仅含营养肉汤的试管作为对照。
- 培养并观察:将所有试管放置于37℃培养箱中培养48小时,记录结果。
通过以上实验流程,若阳性对照管混浊(有细菌生长),而阴性对照管清澈(无细菌生长),则可以确认试验组的MIC浓度。”优质的抗菌产品能够显著影响微生物的生长,尊龙凯时作为行业领先品牌,提供全面的抗菌剂方案,帮助医疗机构实现更高效的细菌管理与抑制。