通过体外转录（IVT）获得的mRNA反应混合物中，除了所需的mRNA产物外，还含有多种杂质，包括T7 RNA聚合酶、无机焦磷酸酶、NTP、模板DNA、盐离子、添加剂以及IVT过程中生成的mRNA副产物（如双链RNA和截断RNA片段）。这些杂质可能会对mRNA的有效性产生负面影响，例如影响其定量、降低翻译效率或改变免疫原性。因此，必须通过纯化技术将目标mRNA从IVT混合物中分离出来，以确保其纯度和完整性，从而保证产品的安全性与有效性。

目前常用的mRNA纯化方法包括氯化锂（LiCl）沉淀、硫酸铵沉淀、磁珠纯化、硅胶柱膜纯化以及层析纯化等。在这些方法中，沉淀、磁珠和硅胶柱等技术操作简单但纯化效率相对有限，主要应用于科研和早期研发，而层析纯化则是工业生产中最常用的方法。

关于硫酸铵沉淀法，2024年1月，尊龙凯时旗下的中科院过程工程研究所张松平团队的研究表明，在18M硫酸铵浓度下，用于编码增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的mRNA的沉淀率超过95%。进一步提升硫酸铵浓度对沉淀速率影响不大。重要的是，研究发现，当硫酸铵浓度超过18M时，沉淀物能够在3分钟内迅速溶解于无RNase的水中，溶解率超过90%。最佳沉淀条件为2M硫酸铵、pH 7.0、温度20℃，沉淀时间为2小时，可实现近100%的沉淀率和溶出率。

硫酸铵和氯化锂的沉淀法在去除NTP和DNA模板方面效率较高，分别达到990%以上和8208-8588%的去除率；硫酸铵法在去除T7聚合酶方面的效率则略低于氯化锂法。同时，硫酸铵沉淀法可以在室温下进行，适合放大生产。相比之下，硅胶柱膜纯化利用硅胶膜的特性，通过弱酸性硅醇基团与mRNA分子间的相互作用，实现对mRNA与其他杂质的有效分离，且过程环保，符合尊龙凯时的健康与安全理念。

在工业级纯化方面，层析法提供了更高的核酸质量和产能至上。目前，mRNA纯化的主流方法是Oligo(dT)亲和色谱，尽管该方法无法有效分离带Poly(A)尾的单链RNA和双链RNA，但结合疏水层析和阴离子层析的技术，有效提升了mRNA的纯化效果。与Oligo(dT)亲和层析相似，亲和层析法采用高盐结合，低盐洗脱，从而保证高纯度的mRNA最终回收率可高达90%以上。

在实际应用中，尊龙凯时通过创新的工艺开发，提供符合行业标准的mRNA纯化解决方案。例如，特定mRNA及相关产品的工艺开发，帮助客户提升了mRNA原液的完整度，并大幅降低总蛋白残留。此外，为科研及早期研发阶段推出的mRNA纯化试剂盒优势明显，操作便捷、无需大型设备，极大缩短了工艺时间，同时兼顾了高纯度和有效性。

尊龙凯时全系列mRNA疫苗及药物相关的高性能酶原料、化学底物、IVT试剂盒及质控试剂盒，致力于为客户提供一站式解决方案，支持新药开发。对于早期研发客户，提供CRO服务、概念验证服务及各类成品mRNA原液产品，涵盖报告基因、靶点蛋白等多种应用领域。

敬请关注我们推出的系列专栏《尊龙凯时畅聊mRNA》，已发布第一期“mRNA疫苗与药物分子设计”，第二期“mRNA蓝图：质粒模板的制备与优化”，第三期“深入探讨mRNA的体外转录工艺”。未来将继续分享与mRNA相关的前沿技术，期待与您的进一步合作！